帶正電荷的 Nanogold®可以參與許多不同的標記反應。
如果您想要綴合的分子具有羧酸基團(例如肽中的C端),您可以使用肽合成中使用的反應將其與帶正電荷的納米金綴合:使用EDC( 1-乙基)激活羧酸-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽)和磺基-NHS;您可以從多種來源購買 EDC。 EDC 與待標記分子上的羧基反應,形成胺反應性 O-酰基異脲中間體。該中間體容易水解,使其在水溶液中的壽命較短。添加磺基-NHS (5 mM) 通過將胺反應性中間體轉化為胺反應性磺基 -NHS 酯來穩定胺反應性中間體,從而提高 EDC 介導的偶聯反應的效率。這種活化的磺基-NHS 酯隨后很容易與氨基反應。
或者,帶正電的 Nanogold® 上的氨基可以使用交聯劑激活。顯示了兩個示例。首先,使用水溶性同雙功能交聯劑雙(磺基-琥珀酰亞胺基)辛二酸酯(BS3) 來綴合肽的N端,其中C端已被保護。該過程的一個特點是它提供了相對較長的鏈接:BS3 的 C8 鏈被添加到帶有胺的丙基上,該胺突出到 Nanogold® 顆粒配體殼的外表面之外。在第二個方案中,水溶性異雙功能交聯劑,磺基-琥珀酰亞胺基 4-[ N-馬來酰亞胺基-甲基]-環己烷-1-羧酸酯 ( Sulfo -SMCC),用于將胺與馬來酰亞胺基團選擇性地與硫醇反應。然后使用馬來酰亞胺衍生物來標記硫醇化生物分子,例如含有半胱氨酸的肽。多種其他交聯劑可用于將胺連接至不同的官能團;