傳代方法概述

1.消化傳代：

        棄去培養(yǎng)基，PBS潤洗一次后加入適量胰酶晃勻（以蓋住細胞表面為宜），放入培養(yǎng)箱消化。細胞呈斑片狀時加入等體積新鮮全培養(yǎng)基終止消化。吹打細胞后轉(zhuǎn)移懸液至潔凈離心管，600g離心5分鐘。棄去上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞至培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)液體積，移入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2.直接傳代：

         用吸管吸取細胞懸液的1/2～1/4至另一瓶中；加入適量的新鮮培養(yǎng)基，補足培養(yǎng)液體積，培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3.離心傳代：

         將細胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)，600 g 離心 5 min，棄去上清。使用新鮮的培養(yǎng)基重懸細胞至新的培養(yǎng)瓶，補足培養(yǎng)液體積，培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞凍存注意事項

細胞凍存步驟：

使用上述傳代步驟至離心后，棄去培養(yǎng)基，用600μL~1mL凍存液重懸細胞后，轉(zhuǎn)移細胞至凍存管。

無血清凍存液可直接凍于-80，否則采取梯度降溫法凍存。

含血清凍存液成分：20％FBS、10％DMSO、70％1640培養(yǎng)液

細胞凍存需注意：

● 細胞數(shù)量過少可能導致復蘇困難，應(yīng)至少有5*105。

● 凍存時應(yīng)處于對數(shù)生長期，狀態(tài)不佳的細胞復蘇困難。

● 盡量采用梯度降溫并使用梯度降溫盒。

● 凍存的細胞不可直接移入液氮，應(yīng)-80凍存超過6小時后再液氮凍存。

● 凍存和復蘇的時間間隔不宜過短，不可小于三天。